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破碎細胞遇到的常見問�
1. 大腸桿菌表達外源蛋白，在超聲破碎的時候，用含�1%triton-X-100的PBS懸浮，然后超聲的效果較好�1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對其他的一些細菌同樣起作用，比如鏈霉菌。在表達重組蛋白后用超聲波細胞破碎儀破碎細胞，采用冰浴，400w，破�2s�1s，但是不一會就產生大量泡沫，影響了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣，zui后都是破碎不完全，而目的蛋白就在這些未破碎的細胞中，怎么辦？
解析：會產生氣泡是因為探頭位置沒放好；探頭一定要接近底部，約0.5-1cm；功率根據儀器不同會有所不同，但可以觀察液面，有波動但不要太劇烈；可以選擇超聲波細胞破碎儀破碎3s�10s，破�20-30次；變幅桿位置擺放也要注意，聽聲音如果不對的話就要及時調整；從菌濃度方面考慮。在破碎時試著加大體積，強度zui好不要超�60%；嘗試破�8s�8s，對有些菌體蛋白來說，難散熱導致蛋白變性產生氣泡，可以停頓時間稍長一些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白�
2. 鏈霉菌（放線菌）超聲破碎條件是什么？
解析：放線菌屬于原核生物系統進化樹上的（G＋C）摩爾百分含量（mol％）高的革蘭氏陽性菌（Eubacteria）分枝類群，它雖然具有原核生物特有的分子生物學特性，但在其不同類群中，細胞壁的化學組分變化很大。在做大腸桿菌超聲時，采用的�400W，破�5s�5s的方法，效果不錯，但是用在鏈霉菌上，由于細胞壁組成差異一般沒什么效果� 鏈霉菌（放線菌）超聲破碎前處理一般是配置成一定濃度的菌懸液。使用超聲波細胞破碎儀破碎時采用的具體條件是：取細菌的24 h培養液于5 000 r／min 下離�5 min收集菌體；用pH 7�5的Na2HPO -NaH2PO 緩沖液洗�3次，再用該緩沖液將菌體配�1�3的菌懸液。置�40 mL大塑料試管內；將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波細胞破碎儀破碎（功�200W�1�2”探頭，破碎30s，間�30s）；破碎液于12 000 r／min下高速冷凍離�30 min，收集細胞碎片和上清夜。洗滌菌體也可以用預冷的生理鹽水或pH8的Tris－HCl，洗滌一次就可以。另外，超聲劑量隨樣品量、菌體改變比較大，功率可以到400�600w，破�5s，停5s，冰浴，要加終濃�1 mM的PMSF。為確定合適的超聲強度和次數，有必要隨時鏡檢觀察菌體是否完全破碎�
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